역상 LC 컬럼에서 머무름이 예상보다 오래 유지되는 일반적인 원인은 무엇입니까? - WKB236458

환경

• C18 컬럼
• 역상
• 머무름 문제
• 오래 유지되는 머무름

답변

원인은 다양합니다. "추가 정보" 섹션을 참조하십시오.

추가 정보

• 새로운 C18 컬럼은 엔드 캡을 완전히 덮기 때문에 경우에 따라 머무름 시간이 길어집니다.
  • 참조: Isocratic Method 또는 Gradient Method 실행 시 새로운 C18 컬럼이 동일한 파트 넘버를 가진 구형의 사용된 컬럼보다 긴 머무름을 보이는 이유는 무엇입니까?
• 컬럼 히터가 너무 차가운 경우:
  • 컬럼 히터가 제대로 작동하지 않으면 예상보다 차가울 수 있습니다.
  • 온도가 낮으면 분석 물질이 예상보다 늦게 용리될 수 있습니다.
  • 외부 온도계를 사용하여 컬럼 히터의 실제 온도를 측정합니다.
• 유속이 너무 느린 경우:
  • 시스템 체크 밸브 또는 펌프가 제대로 작동하지 않거나 흐름 경로가 막힌 경우 유속이 예상보다 느릴 수 있습니다.
  • 유속이 느리면 분석 물질이 예상보다 늦게 용리됩니다.
  • 실행 중, 일정 기간 동안 waste를 눈금 실린더로 수집합니다. 수집된 부피가 예상 부피인지 확인합니다.
•  Gradient Proportioning Valve (GPV)가 제대로 작동하지 않음:
  • Gradient Proportioning Valve(GPV)(저압 혼합)로 인해 유기물이 너무 적거나 수용액이 너무 많이 전달될 수 있습니다.
  • 이 두 경우 모두 머무름을 높일 수 있습니다.
• 기울기 혼합(고압 혼합)이 제대로 작동하지 않는 경우:
  • 시스템이 이동상을 적절하게 혼합하지 않을 수 있으며, 이로 인해 유기물이 너무 적거나 수용액이 너무 많이 전달될 수 있습니다.
  • 이 두 경우 모두 머무름을 높일 수 있습니다.
• 잘못된 사전 혼합 이동상이 조성된 경우:
  • 사전 혼합 이동상이 너무 적은 유기 용매(또는 너무 많은 수용성 용매)를 함유하게 되면 머무름 시간이 예상보다 늘어나게 됩니다.
• 사용한 이동상 pH가 올바르지 않습니다.
  • 약염기성 분석 물질은 pKa보다 2pH 단위 이상의 pH에서 중화될 때 더 오래 머무릅니다.
  • 약산성 분석 물질은 pKa보다 2pH 단위 이하의 pH에서 중화될 때 더 오래 머무릅니다.
    • Method에 대해 잘못된 pH의 이동상을 실수로 사용하면 예기치 않은 머무름 문제가 발생할 수 있습니다.
• 더 큰 Dwell 부피(기울기 지연):
  • Dwell 부피가 더 큰 시스템(기울기 지연)은 Dwell 부피가 낮은 시스템(기울기 지연)에 비해 머무름 시간이 더 깁니다.
    • 참조: Dwell Volume (Gradient Delay) and Extra-Column Volume (Bandspread, System Dispersion): What Are They and How Do They Impact Method Transfer(Dwell 부피(기울기 지연) 및 컬럼 외 부피(밴드 스프레드, 시스템 분산)는 각각 무엇이며 분석법 전환에 어떤 영향을 미칩니까?)
• 체크 밸브 문제:
  • 끈적 끈적한 체크 밸브로 인해 이동상이 이동상 흐름 대신 이동상 용기로 다시 펌핑되는 결과를 초래할 수 있습니다.
    • 이로 인해 이동상 수성 대 유기물의 비율이 부적절할 수 있습니다.
      • 체크 밸브 문제로 인해 이동상으로 들어가는 유기물 양이 적을수록 머무름 시간이 길어집니다.
• 시스템 누출:
  • Dynamic leak 테스트(또는 유사한 테스트)를 실행하여 시스템에 누출이 있는지 확인하여 부정확한 이동상 수성-유기 비율을 유발하는 누출이 없는지 확인합니다.
• 이동상이 오래되었거나 이동상 변형제의 성능이 저하되는 등 예상보다 머무름 시간이 긴 데는 추가적인 이유가 있을 수 있습니다.
• 일부 사전 혼합 이동상은 시간이 지남에 따라 분할 또는 분리될 수 있으며(예: H2O 및 이소프로판올), 물이 바닥에 가라앉고 Retention Time이 이에 비례하여 증가합니다. (참고: 염 농도가 높을수록 분리 가능성이 높아집니다. ACN과 H2O는 농도가 높을수록 분리될 수 있습니다.)
  • 해결 방법: 시스템이 혼합되도록 두거나 교반 플레이트를 이동상에 있는 교반 막대와 함께 사용합니다.