BioAccord 세포 배양 배지 시스템 적합성 테스트를 수행하는 방법 - WKB231508

1) 소개

SST는 전체 LC-MS 시스템이 일상적인 사용 전에 완전히 작동하도록 설계되었습니다. 이 테스트는 Waters 인증 표준 용액(Vion Test Mix)을 사용하여 10분 내로 엄격한 품질 기준(질량 정확도, RT 안정성, 피크 분리, 피크 응답 재현성 및 용매 백그라운드)을 평가하도록 설계되었습니다. 이렇게 하면 사용자가 데이터 수집을 수행하기 전에 LC-MS 기기의 상태를 평가하는 데 도움이 됩니다. 이 Method를 사용하면 질량 및 머무름 시간을 품질 기준으로 사용하여 9가지의 물질을 스크리닝할 수 있으며 시스템의 스크리닝 기능을 추가로 입증하기 위해 일치하는 조각을 표시하고 식별할 수도 있습니다.

Waters는 데이터에 대한 최고 수준의 신뢰도를 유지하기 위해 이 테스트 또는 유사한 테스트를 일상적으로 수행할 것을 권장합니다.

양이온 모드에서 주입된 9가지 화합물의 추출 이온 크로마토그램의 예시.

2) 체크리스트

• 용매를 확인하고 ACQUITY Premier LC 시스템과 세척 실린지를 프라임합니다.
• 새 분석을 만듭니다.
• 초기 조건으로 이동합니다.
• 2번의 blank 주입과 Vion Test Mix를 5회 주입합니다.
• 보고서를 검토하여 시스템이 성능 기준을 충족하는지 확인합니다.

3) 시료전처리

• 1mL의 0.1% 포름산(이동상 A) 수용액을 Waters 바이알에 옯겨 blank 샘플을 준비합니다. 이를 Sample Manager의 위치 1:A,1에 놓습니다.
• Waters 파트 186008462 Vion Test Mix 앰플 용기의 내용물을 Waters 바이알에 이동시키고 이를 Sample Manager의 위치 1:A,2에 놓습니다.

4) 세부 절차

1. ACQUITY Premier UPLC 용매 용기를 확인하고 이동상 부피가 충분한지 확인합니다.
2. 위치 1:A,1에 blank가 있고 위치 1:A,2에 Vion Test mix가 있는지 확인합니다.
3. 고정 질량 용액이 충분한지 확인합니다(RDa 유로 왼쪽의 용액 용기).
4. UNIFI 소프트웨어를 엽니다.
5. SST를 처음 수행할 때는 UNIFI UEP 파일을 가져옵니다.
   • SST CCM.uep 파일을 UNIFI(샘플 목록, Analysis Method, 예제 데이터 및 보고서 템플릿 포함)로 가져옵니다.
6. "Create analysis by acquiring new data"를 선택하여 새 분석을 생성합니다.
7. "CCM SST sample list"를 선택합니다.
8. "CCM SST Analysis Method"를 선택하고 Next를 클릭합니다.
9. 분석 이름과 폴더를 상황에 맞게 조정하고 Next를 클릭합니다.
10. 시스템을 선택하고 Next를 클릭한 후 Finish를 클릭합니다.
11. 오른쪽 하단의 녹색 체크 표시 아이콘을 클릭하여 "Instrument System" 측면 패널을 엽니다.
12. Binary Solvent Manager에서 Prime A/B solvents를 선택하고 start priming을 선택한 다음 창을 닫습니다.
13. Sample Manager FTN에서 Prime Syringe를 선택하고 프라임을 수행하고 완료되면 창을 닫습니다.
14. Summary에서 Go to initial conditions를 선택합니다.
15. Binary Solvent Manager의 압력차가 30psi 미만이 될 때까지 기다립니다.
16. 주입할 샘플 목록 라인을 선택합니다.
17. Start 버튼을 클릭합니다("Process samples", "Save results", "Generate report" 및 "Save report and do not print"를 반드시 선택해야 합니다.)
18. 수집이 완료되면 통과 또는 실패에 대한 보고서를 검토합니다. (예시 보고서: "CCM SST Report.pdf" 참조)

SST PASS: 완료

BioAccord LC-MS 시스템이 완전히 작동합니다. 질량 정확도, RT 안정성, MS 응답 및 재현성에 대한 품질 기준은 각각의 양극 및 음극에 대해 5회 반복 주입에 걸쳐 기대치 이내입니다. 분석 결과는 다음 기준을 충족합니다. 1). 식별된 구성 요소의 질량 정확도는 +/- 5mDa 이내입니다 2). 관찰된 RT %RSD(상대표준편차)가 1.00%보다 우수합니다. 3). MS 응답 %RSD(상대표준편차)가 10.0%보다 우수합니다 4). 설파디메톡신(Sulfadimethoxine) 평균 반응이 양극성에 대해 5,000카운트보다 큽니다 5). 설파디메톡신(Sulfadimethoxine) 평균 반응이 음극성에 대해 1,000 카운트보다 큽니다

SST FAIL: 오류와 함께 완료됨

BioAccord LC-MS 시스템은 새 데이터를 수집하기 전에 사용자의 주의가 필요합니다. 하나 이상의 품질 기준이 각각의 양극 및 음극에 대해 5회의 반복 주입에서 예상 결과를 충족하지 않습니다. 보고서의 다음 페이지에는 통과 기준을 충족하지 못한 경우 빨간색 플래그가 표시됩니다.

다음은 시스템 문제 해결을 위한 몇 가지 팁입니다.

1). 질량 오류 플래그를 사용하려면 새 RDa 검출기 설정을 수행해야 합니다.
2). 관찰된 RT %RSD(상대표준편차) 및 MS Response %RSD(상대표준편차) 플래그는 크로마토그래피 시스템의 문제를 나타냅니다. 이를 위해서는 흐름 경로에 누수가 있는지 확인하고, 새 용매를 준비하고, 시스템을 프라임해야 합니다.
3). 설파디메톡신(Sulfadimethoxine) 반응의 플래그는 RDa 검출기의 감도 문제를 나타냅니다. 새 샘플을 만들거나 조리개 디스크를 교체해야 할 수 있습니다.
4). 분석 주입 목록의 한계 상태 열을 통해 문제를 일으키는 특정 주입을 검토할 수 있습니다.

5)    Analysis Method

 

목적 성분 관리
성분명	예상 RT(분)	예상 질량(Da)	부가물	화학식	농도(µg/mL)
설파구아니딘(Sulfaguanidine)	2.40	214.0524	+H, -H	C7H10N4O2S	5.0
아세트아미노펜(Acetaminophen)	3.60	151.0633	+H, -H	C8H9NO2	10.0
Val-Tyr-Val	3.80	379.2107	+H, -H	C19H29N3O5	2.5
카페인*	4.00	194.0804	+H	C8H10N4O2	1.5
류신 엔케팔린(Leucine enkephalin)	4.60	555.2693	+H, -H	C28H37N5O7	2.5
베라파밀(Verapamil)*	5.70	454.2832	+H	C27H38N2O4	0.2
설파디메톡신(Sulfadimethoxine)	5.80	310.0736	+H, -H	C12H14N4O4S	1.0
레서핀(Reserpine)*	5.90	608.2734	+H	C33H40N2O9	0.6
테르페나딘(Terfenadine)*	6.50	471.3137	+H	C32H41NO2	0.2
*이 화합물은 음이온 모드에서 이온화되지 않습니다.
목적 기본 양
사용자 정의 레벨 추가	POS	NEG

 

 

기기 컬럼 케미스트리	ACQUITY Premier HSS T3 2.1 x 150mm(186009469)
컬럼 온도	40°C
유속	250µL/분
이동상 A	0.1% 포름산 수용액
이동상 B	90% ACN / 10% IPA / 0.1% FA
세척액	40% ACN / 40% 물 / 20% IPA
퍼지액	90% 물 / 10% ACN
씰(Seal) 세척액	90:10 물/메탄올

 

 

시간(분)	유속(mL/분)	조성 A(%)	조성 B(%)	커브
0.00	0.250	95.0	5.0	초기
0.50	0.250	95.0	5.0	6
7.00	0.250	15.0	85.0	6
7.80	0.250	15.0	85.0	6
8.00	0.250	95.0	5.0	6
10.00	0.250	95.0	5.0	6

 

 

ACQUITY RDa 검출기
모드	"Full scan" 또는 "Full scan with fragmentation"
질량 범위	저분자(50 – 800m/z)
극성	Positive(양극성) 또는 Negative(음극성)
스캔 속도	5Hz
콘 전압	양이온 모드의 경우 기본(30V), 음이온 모드의 경우 기본(40V)
조각화 콘 전압	사용자 정의 60V ~ 140V
이벤트 테이블	0.00 폐기물로 전환 1.00 MS로 전환 8.00 폐기물로 전환
모세관 전압	양이온 모드의 기본(1.50kV) 및 음이온 모드의 경우 기본(0.80kV)
탈용매화 온도	기본(550°C)
지능형 데이터 캡처	켜기
고정 질량 보정 모드	표준물질

 

 

샘플 목록 대기열
샘플 유형	블랭크 또는 QC
실행 시간(분)	10
주입 부피(µL)	0.5
반복	1
극성(기기)	양이온/음이온

 

 

피크 프로세싱 설정 3D 피크 검출
저에너지 강도 문턱값	1000 카운트
표적 스크리닝 설정 머무름 시간 기준 표적
머무름 시간 화면 활성화	활성화됨
규칙에 따라 표적 피크 식별	RT 창에서 가장 큼
절대 머무름 시간 식별 허용 오차 사용	0.5분
표적 스크리닝 설정 질량 기준 표적
표적 질량 허용 오차	20ppm
구조에서 예측 조각 생성	활성화됨
조각 일치 허용 오차	10.0mDa
크로마토그램 추출	활성화됨
허용 오차	수동, 30mDa
식별된 모든 이온을 포함하는 질량 크로마토그램 추출	활성화됨
계산 요약
필드	샘플 유형	그룹화 기준
관찰된 RT(분)	QC	샘플 위치
MS 반응	QC	샘플 위치
한계 확인
노드	필드 이름	성분	레벨	최소 오류	최대 오류
성분	질량 오류(mDa)	모두	모두	-5	5
요약 필드	관찰된 RT(분):% RSD (%)	모두	모두		1
요약 필드	MS 반응:% RSD (%)	모두	POS		10
요약 필드	MS 반응:% RSD (%)	모두	NEG		10
요약 필드	MS 반응:평균	설파디메톡신(Sulfadimethoxine)	POS	5000
요약 필드	MS 반응:평균	설파디메톡신(Sulfadimethoxine)	NEG	1000

샘플 유형은 모든 한계 확인 필드의 QC입니다