시스템에 심한 PEG 오염 또는 기타 오염 후 산/염기 세척 프로토콜을 사용하여 ACQUITY UPLC를 세척하는 방법 - WKB16167

주의 - 고농도의 염기 및 산은 코팅을 손상시킬 수 있으므로, HPS 코팅이 있는 부품이 포함된 ACQUITY PREMIER LC 모듈을 세척하지 마십시오. KCS wkb116495에 첨부된 Premier 절차를 사용하십시오.

참고: ACQUITY PREMIER BSM 및 QSM 펌프에는 HPS 코팅 부품이 포함되어 있지 않으므로, 출력이 Sample Manager에서 연결이 끊기고 폐기물로 전환될 경우 이 절차를 사용하여 펌프를 플러시할 수 있습니다. 산/염기 세척 후, Sample Manager에 다시 연결하기 전에 펌프를 물 및 IPA로 플러시하여 모든 암모니아를 제거해야 합니다.

목적 또는 목표

불량 용매 사용으로 인해 ACQUITY UPLC가 PEG에 의해 오염된 경우 백그라운드가 관찰됩니다. 양호한 용매로 전환했더라도 Vion, Xevo G2-XS 및 Synapt G2-Si 같은 민감한 질량분석기에서 PEG 백그라운드는 여전히 관찰됩니다. 또한 BioAccord (RDa) 또는 Vion에서 수행한 원형 단일클론항체 분석(intact monoclonal antibody)에서 스펙트럼 피크 프론트(Fronting)가 관찰되는 경우 이 프로토콜을 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜을 기타 오염 제거에도 사용할 수 있습니다. 이 절차는 산성/염기성 세척 프로토콜에 따라 ACQUITY를 세척하는 방법에 대해 설명합니다.산성염기 세척 절차를 수행하려면 LC 퍼징 키트 186010210을 주문하십시오.

환경

• ACQUITY UPLC
• ACQUITY UPLC I-Class
• ACQUITY UPLC H-Class

절차

1. UPLC 컬럼을 분리하고 유니온으로 교체합니다. 각 세척 단계를 위해 모든 용매 라인을 각 용매 용기에 넣습니다. Critical Clean 유리 용기 키트(주문 브로셔)를 사용하십시오. 싱커 스톤을 한동안 사용하셨다면 이미 사용 중인 싱커 스톤도 제거해야 합니다.
2. 아래에 나열한 용매 순서에 따라 라인 A 및 B를 각각 5분 동안 퍼지합니다. FTN을 60초 퍼지하여 니들을 세척하고 샘플 실린지를 40회 퍼지합니다. 분석 또는 샘플 목록을 생성하고 기기에서 실행되는 것과 동일한 용매 10μL를 20회 주입합니다. A1:B1 50:50을 사용하여 0.8mL/분의 유속으로 1분 동안 실행합니다. LC 흐름을 질량분석기가 아닌 waste로 유도합니다. UV 또는 PDA와 같은 특정 검출기에 대해서는 흐름이 검출기를 통과할 수 있습니다. 워터 플러시는 이전 용매를 시스템에서 제거하는 경우에만 필요합니다. 주입은 필요하지 않습니다.
   1. 워터 플러시로 시스템에서 이동상을 제거합니다.
   2. Magic mix; 물 - 아세토니트릴 - 메탄올 - IPA 1:1:1:1, 2-10%의 포름산 포함(아세토니트릴 대신 아세톤을 사용할 수 있습니다. 186010210 키트를 주문하여 아세톤을 얻을 수 있습니다)
   3. 워터 플러시로 시스템에서 산을 제거합니다.
   4. 10% NH4OH 수용액은 PEG 및 기타 폴리머를 제거합니다.
   5. A1 및 A2 라인은 10% NH4OH, B1 및 B2 라인은 100% IPA을 채용합니다(A 및 B 라인은 H 등급 10% NH4OH, C 및 D 라인은 100% IPA). 이는 PEG를 제거하기 위한 강력한 용매의 조합입니다.
   6. 워터 플러시로 시스템 바닥에 있는 오염물질을 제거합니다.
   7. 100% IPA
   8. 마지막 헹굼 절차는 워터 플러시입니다.
3. 메탄올(Methanol) 또는 IPA가 용리액으로 사용되지 않을 경우 오래된 싱커 스톤을 새 스테인리스 스틸 스톤 또는 티타늄 스톤(289002172)으로 교체합니다.

추가 정보

암모니아 용액의 실제 최종 농도는 10%여야 합니다. 그러므로 28 ~ 30% 암모니아를 사용한다면 3배 희석만 가능합니다. 암모니아 용액은 심한 악취를 풍길 수 있으니 흄(Fume) 후드를 착용하고 용매를 제조하며, 기기에 용매병을 놓을 때 각별히 주의를 기울이십시오.

M-class에서 이 프로토콜을 사용하지 마십시오. PeekSil 및 실리카 튜빙은 이 pH를 견디지 못합니다.

8단계에서 컬럼과 MS를 흐름 경로에 다시 연결하기 전에 물 헹굼액의 pH를 모니터링하여 실험실 pH로 회복되는지 확인합니다.

모든 수성 이동상을 매주 새롭게 제조하고 Magic Mix(25/25/25/25 물/이소프로필 알코올/메탄올/아세토니트릴) 또는 100% 메탄올, 아세토니트릴과 같은 유기 용매로 3회 헹군 다음 리필 전에 사용할 용매로 다시 헹굽니다. 이동상을 너무 넘치게 담으면 안 됩니다. 이동상을 담은 용매병은 식기세척기로 세척하면 안 됩니다.

• 질량분석기가 있는 경우 세척 단계 전에 MS 유로를 waste로 흐르게 하거나 또는 전환하도록 설정합니다. 이러면 밸브는 손상되지는 않지만 사용자 또한 이가 소스로 가는 것을 원하지 않을 것입니다.