방출 모드에서 ACQUITY UPLC FLR 검출기를 사용할 때 게인을 변경하면 감도가 변경됩니까? - WKB118420

환경

• ACQUITY UPLC FLR 검출기
• 2475 Multi-Wavelength 형광 검출기

답변

■ 형광 검출기로 수집할 수 있는 모드
Energy 모드
직접 형광 강도를 출력합니다. 강도는 게인에 따라 변경됩니다. 검출 한계: 10000
Emission 모드
이 모드에서는 검출기 내부에서 형광 강도가 보정되고 계산되어 출력됩니다.
강도는 물 Raman의 상대 값을 사용하여 계산됩니다.
방출 강도는 정규화에서 Raman 강도 및 게인 값으로 형광 강도 값을 보정하여 출력됩니다.
출력 값이 게인의 영향을 받지 않는 수집 모드의 경우, 개별 검출기 간 또는 검출기 열화로 인한 강도 차이가 없습니다.

■ Emission 모드의 경우
다음 계산은 검출기 내부에서 수행되어 강도를 출력합니다.
방출 단위 = ( 수집시 형광 강도/수집시 게인) × ( 정규화시 게인 / 정규화시 Raman 강도) × 100

수집시 형광 강도: 직접 형광 강도를 가진 게인의 영향을 받는 값
수집시 게인: 수집 중 게인 값(Instrument Method에 의해 설정된 값)
정규화시 게인: 정규화시 측정되는 게인 값
정규화시 Raman 강도: 정규화에서 얻은 Raman 강도

위의 공식에서 방출 단위는 게인에 따른 형광 강도를 정규화한 값으로 보정됩니다.
(정규화에서는 Raman 강도를 일정하게 유지하는 게인 값이 측정됩니다.)
따라서 게인을 변경해도 강도는 변경되지 않습니다.

그러나 게인이 너무 높거나 낮으면 방출 모드에서도 설정된 게인에 따라 강도가 변경될 수 있습니다.
만약 수집시 형광 강도가 FLR의 검출 한계(에너지 모드에서 최대 = 10000)를 초과하는 경우 방출 단위도 범위를 벗어납니다. 이 경우, 에너지 모드에서 강도가 10000 아래로 떨어지도록 게인 값을 낮추어 올바른 피크를 얻을 수 있습니다.
또한 게인 값이 매우 낮으면 방출 모드에서도 게인에 따라 강도가 다를 수 있습니다.
고려되는 이유는 매우 낮습니다. 수집시 형광 강도 값을 너무 낮게 지정하면 방출 강도 계산에 큰 오류가 발생합니다.

■ 결론
화합물의 최적 게인 범위 내에서 게인이 변경될 때 방출 단위의 강도는 변경되지 않습니다.
그러나 게인 값이 너무 높거나 너무 낮으면 강도가 다르거나 게인 값이 범위를 벗어날 수 있습니다.
방출 강도를 계산할 때 게인 값이 계산에 사용되므로 방출 모드와 게인이 완전히 관련이 없는 것은 아닙니다.

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