Empower 3 PDA: Purity 1 Angle, Purity 1 Threshold란 무엇입니까? 피크 순도는 어떻게 측정합니까? - WKB85832

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답변

★ 순도 ★ ★ 테스트란 무엇입니까?
순도 테스트는 피크 상단의 스펙트럼 파형과 피크의 모든 스펙트럼 파형을 수정하고 그 모양을 비교합니다.
스펙트럼의 모양이 피크의 중간에서 다른 경우, 먼저 다른 스펙트럼 파형을 가진 기타 성분이 피크와 공용리(co-elution)되는 상황을 고려해야 합니다.
이것이 바로 순도를 측정하는 방법입니다.

★ 전체 피크의 순도
전체 피크의 순도는 Purity angle과 Threshold angle에 의해 결정됩니다.

Purity angle: 피크의 각 스펙트럼과 피크 상단의 스펙트럼 사이의 각도의 평균값입니다. 즉, 전체 피크의 순도는 이 값에 의해 결정될 수 있습니다.
・ 순도값이 0.2 미만인 경우
이 Method의 검출 한계는 약 0.1~0.2입니다. 따라서 순도값이 0.2 미만인 피크는 거의 동일한 스펙트럼 성분으로 구성된다고 볼 수 있습니다.
측정 정밀도는 육안 점검(최대 1도)보다 우수합니다.
・ 순도값이 1 이상인 경우
비록 육안 점검으로 관찰할 수 있는 모양의 차이가 있지만, purity angle만으로 다른 스펙트럼을 가진 성분과 공용리(co-elution)되었다는 것을 의미하지는 않습니다.
이는 기타 성분과의 공용리(co-elution) 외에 스펙트럼에 노이즈가 포함되었을 경우에도 이러한 차이가 발생할 수 있기 때문입니다. 특히 저농도 성분에 주의해야 합니다.

Threshold angle: 전체 피크에 대한 노이즈(S/N 비율로 평가)의 영향을 나타내는 굴절률 값입니다. 이 값은 purity angle의 값을 비교하여 평가합니다.
・ purity angle이 purity threshold angle보다 작을 경우
purity angle이 큰 경우에도, 노이즈의 영향을 나타내는 threshold angle 범위 내에서 명확한 공용리(co-elution)가 없는 것으로 확인할 수 있습니다.
・ purity angle이 purity threshold angle보다 클 경우
purity angle이 스펙트럼 차이가 노이즈에 의한 것임을 나타내는 purity threshold angle보다 클 경우, 노이즈의 영향을 뛰어넘는 스펙트럼 차이가 있습니다.
다른 스펙트럼을 가진 성분과 공용리(co-elution)될 가능성이 높습니다.

고려사항

1. Purity angle과 Purity threshold이 큼
"Purity angle이 purity threshold angle보다 작은 경우", 명확한 공용리(co-elution)가 없습니다. 예를 들어, Purity angle = 9.5, Threshold angle = 10.0
Purity angle이 Threshold angle보다 0.5 작기 때문에 명백한 공용리(co-elution)는 없는 것으로 측정되지만 일부 경우에는 10.0 미만인 작은 각도 차이를 가진 스펙트럼 성분과 공용리(co-elution)할 수 있습니다.
각도 10은 표준화된 스펙트럼 간의 차이가 약 10%이며, 차이가 10 미만인 스펙트럼 성분은 검출되지 않을 수 있음을 의미합니다.

2. UV/Vis 스펙트럼의 낮은 특이성
Empower3 PDA는 스펙트럼 간의 차이를 측정하며 화학 성분을 직접 검출하지 않습니다. 특히, UV/Vis 스펙트럼의 파형은 화학 구조의 기본 골격에 의해 결정되며, 터미널 알킬기에 따라 변화하지 않습니다.
즉, 동일한 파형을 가진 성분이 많기에 Empower3 PDA에 의해 검출되지 않을 수 있습니다.

3. 공용리(co-elution) 성분의 양
공용리(co-elution) 성분의 양이 동일하지만, Purity angle 값은 피크 기본 성분과 공용리(co-elution) 성분의 스펙트럼 차이에 따라 크게 달라집니다.
공용리(co-elution) 성분을 식별할 수 없는 경우, 공용리(co-elution) 성분의 양을 Purity angle에서 평가할 수 없습니다.

4. 표준물질의 순도 불량
고순도 표준 샘플은 주로 다음과 같은 원인으로 순도가 불량인 것으로 판단할 수 있습니다.
・ 너무 높은 농도
부분 파장에서만 흡광도가 1AU를 초과하지만, 흡광도 직선성이 상실되고 스펙트럼이 왜곡되며 순도는 불량한 것으로 측정됩니다. 최대 흡수 시 흡광도가 1AU를 초과하지 않도록 농도를 낮추고 측정을 다시 수행하십시오.
・ 이동상의 높은 백그라운드 흡수
낮은 파장에서 이동상의 백그라운드 흡수가 크면 해당 파장에서의 흡광도의 직선성 범위는 작아지고 측정된 스펙트럼이 왜곡됩니다. 이런 경우, Processing Method의 Purity 탭에서 계산할 파장 범위를 좁히고 다시 프로세싱합니다. 또는 백그라운드 흡수가 큰 파장 및 재측정을 피하십시오.

5. 스펙트럼이 크게 다른 성분이 공용리(co-elution) 되어야 함
공용리(co-elution)를 찾을 수 없는 주요한 원인은 유사한 스펙트럼이 소량으로 공용리(co-elution)되었기 때문이지만 스펙트럼이 크게 다른 경우에도 공용리(co-elution)를 검출하지 못하는 경우가 있습니다.
즉 공용리(co-elution) 성분이 피크와 균일하게 중첩되는 경우입니다.
이런 경우, 같은 비율로 공용리(co-elution)되는 성분이 피크 바닥과 피크 정점 모두에서 중첩되어 판단 표준으로 사용됩니다. 간단히 말해, 각 스펙트럼의 파형은 같은 비율을 가진 두 파형의 합과 동일합니다.
이는 순도 테스트로 검출할 수 없습니다.
이런 경우, 피크 정점 파형이 표준물질의 스펙트럼과 다른지 확인하여 공용리(co-elution) 존재 여부를 확인합니다. 이 작업은 라이브러리 검색으로 수행할 수 있습니다.

추가 정보

Empower 피크 순도를 다루는 문서가 있습니까? - WKB46540