Empower 3에서 Purity Thresholds는 어떻게 설정합니까? - WKB11215

목적 또는 목표

Purity Thresholds를 설정합니다.

환경

• Empower 3
• PDA 데이터

절차

다음 지침에 따라 Solvent Angle을 추정합니다.　

적절한 시그널 대 노이즈 비율을 얻기 위해, 파장 범위에 사용할 수 있는 가장 투명한 이동상을 사용합니다. 예를 들어, 낮은 자외선 흡광도를 위해 메탄올 대신 아세토니트릴을 사용합니다.

최고 흡광도에서 1AU 미만의 피크 높이를 생성하는 샘플량을 주입합니다. 이 조건은 최상의 Purity Angle 측정 결과를 산출합니다. 필요하면 MaxPlot 파생 채널 기능을 사용하여 데이터 채널을 추출합니다.

Threshold Criteria 매개 변수에 대해 Noise+Solvent를 선택한 경우 용매 각도를 추정하려면 다음과 같이 합니다.　

1. 일상적으로 사용하는 최고 농도에서 화학적으로 순수한 표준물질을 6회 반복 주입합니다.

권장 사항: 해당 농도에서 최대 흡광도의 피크 높이가 1AU 미만인지 확인합니다.　

2. 하나의 표준물질 주입에서 스펙트럼 라이브러리를 만듭니다.

3. PDA Processing Method를 만들어 Peak Purity 시험 및 Library Matching을 수행합니다.

4. Noise에 대한 Threshold Criteria를설정합니다.

5. Processing Method를 Method Set에 저장한 다음 Method Set을 적용합니다.

6. 각 주입에 대해 계산된 Purity Angle 및 Match Angle을 기록합니다.

7. 표준물질을 반복 주입하여 얻은 Purity 또는 Match Angles에 기초하여 Solvent Angle을 추정합니다.

팁: 최상의 결과를 얻으려면, 화학적으로 순수한 참조 표준물질을 사용하여 각 Method에 대해 Solvent Angle을 실험을 통해 결정해야 합니다.　

8. Purity Angle의 경우, 얻어진 최고 Purity Angle과 동일한 Solvent Angle을 지정합니다.

팁: 이 Solvent Angle은 최고 농도보다 낮은 모든 샘플 농도에서 사용할 수 있습니다. 각 분석에 대해 계산 된 Purity Threshold는 Solvent Angle및 Noise Angle의 합계입니다.　

9. Library Match Angle의 경우, 얻어진 최고 Match Angle과 동일한 Solvent Angle을 지정합니다.

팁: 이 Solvent Angle은 최고 농도보다 낮은 모든 샘플 농도에서 사용할 수 있습니다. 각 분석에 대해 계산된 Match Threshold는 Solvent Angle과 Noise Angle의 합계입니다.　

적절하게 설정된 Solvent Angle의 경우　

Purity Angle이 Purity Threshold보다 높으면 미지 물질에 공용리(co-elution)가 포함되어 있음을 의미합미다. 반대로, Purity Angle이 Purity Threshold보다 낮으면 공용리(co-elution)가 없음을 나타냅니다.

Match Angle이 Match Threshold보다 높으면 미지 스펙드럼은 라이브러리 스펙트럼이 도출된 화합물과 다른 화합물입니다. 또는 미지 물질이 혼합물이거나 라이브러리에 있는 성분과 다를 수도 있습니다. 반대로 Match Angle이 Match Threshold보다 낮으면 미지 스펙트럼이 라이브러리의 해당 스펙트럼과 매우 유사함을 나타냅니다.

임계값 기준 고려 사항　

Threshold Criteria 매개 변수를 사용하여 Peak Purity 테스트 및 Library Matching에 영향을 주는 비이상적인 요소를 계산하기 위한 방법을 선택합니다. Peak Purity 테스트와 Library Matching 시 노이즈 또는 용매 영향의 영향을 보상하기 위해, Purity 탭과 PDA Processing Method 창의 PDA Library Search 탭에서 Threshold Criteria 매개 변수를 설정할 수 있습니다.　

Peak Purity 및 Library Matching 결과 해석 시, Purity나 Match Angle을 Purity나 Match Threshold(Angle)와 비교하여 피크가 스펙트럼상으로 균질적인지 여부 또는 스펙트럼이 서로 유사한지 여부를 파악합니다.　

팁: Peak Purity 테스트의 경우, 가능하면 항상 AutoThreshold를 사용합니다.　

Peak Purity 테스트의 경우, Threshold Criteria를 너무 낮게 설정하면 용리액에 대한 위양성 결과가 나타날 수 있습니다. Threshold Criteria를 너무 높게 설정하면 공용리(co-elution)가 발생한 증거가 누락될 수 있습니다.

Processing Method 창의 Purity 탭에서 Threshold Criteria 매개 변수에 대한 AutoThreshold(기본값)를 선택하면, Empower 소프트웨어는 Threshold를 Noise Angle과 Solvent Angle의 합계로 계산합니다. Empower가 Noise Angle을 계산할 수 있도록 적절한 노이즈 간격을 선택해야 합니다. Empower가 Solvent Angle을 계산합니다.

Purity 탭이나 Processing Method 창에서 PDA Library Search 탭의 Threshold Criteria 매개 변수로 Noise + Solvent를 선택하면, Empower 소프트웨어는 다시 Threshold Criteria를 Noise Angle과 Solvent Angle의 합계로 계산합니다. Empower가 Noise Angle을 계산할 수 있도록 적절한 노이즈 간격을 선택해야 합니다. 그러나 수동으로 Solvent Angle을 측정해야 합니다.

AutoThreshold를 임계값 기준으로 사용　

Empower 소프트웨어는 Threshold Criteria를 사용하여 피크 순도 테스트 및 Multicomponent Peak Purity 테스트에 사용된 Threshold Angle을 계산합니다. Peak Purity 테스트 및 Multicomponent Peak Purity 테스트에 사용되는 경우, Threshold Criteria의 기본값은 AutoThreshold입니다. AutoThreshold가 자동으로 Solvent Angle을 계산하기 때문에, AutoThreshold를 선택하면 Purity 탭의 Solvent Angle 매개 변수가 비활성화됩니다.　

AutoThreshold가 선택된 상태에서 PDA Processing Method를 사용하여 Peak Purity 테스트 또는 Multicomponent Peak Purity 테스트를 수행하면 Empower 소프트웨어가 자동으로 다음과 같은 단계를 실행합니다.　

크로마토그램에서 각 피크에 대한 Solvent Angle을 결정합니다. Solvent Angle은 피크의 최대 분광 흡광도(MSA)의 기능으로 자동 계산됩니다. MSA는 피크에 대해 바탕선 보정 분광 흡광도의 최대값입니다.

선택한 노이즈 간격 및 피크 스펙트럼을 기준으로 Noise Angle을 계산합니다.

크로마토그램의 각 피크에 대한 Threshold Angle을 해당 노이즈 및 Solvent Angle의 합으로 계산합니다.

AutoThreshold는 각 피크의 Solvent Angle을 정확하게 계산하지만, 특수한 분리의 경우에는 AutoThreshold를 검증해야 합니다.

사용자 응용 프로그램에 대해 AutoThreshold를 검증하려면 다음과 같이 하십시오.　

1. 알려진 화합물(표준물질)을 6회 반복 주입하여 바탕선 분리 및 순수 피크를 산출합니다.

2. 이 표준물질의 최대 스펙트럼 흡광도(MSA)를 기록합니다.

팁: AutoThreshold를 사용하려면 Waters는 MSA가 1AU 미만인 표준물질을 사용할 것을 권장합니다. 1AU 이상에서는 광도 오차가 증가하기 때문에 Peak Purity 측정은 화합물의 MSA가 1AU를 초과할 것입니다. 이럴 때는 피크 순도 측정이 공용리(co-elution)가 존재에 대해 크게 덜 민감합니다.　

3. 노이즈 간격을 측정합니다.

4. Processing Method 창의 Purity 탭에서 AutoThreshold를 선택해야 합니다.

5. 필요에 따라 다른 매개 변수를 수정한 다음, Method를 저장합니다.

6. PDA 데이터를 프로세스합니다.

7. 각 주입에 대해, 순수 피크의 Purity Angle이 Threshold Angle보다 작은지 확인합니다.

6회 주입 모두에서 Purity Angle이 Threshold Angle보다 낮으면, AutoThreshold를 사용하여 미지 시료에 대한 Peak Purity 테스트를 수행할 수 있습니다. Peak Purity 테스트를 한 AutoThreshold에서 얻은 Threshold 값은 MSA가 1.0AU 미만이고 표준물질 MSA의 5배 미만일 경우 미지 물질에 대해 사용할 수 있습니다.　

예:　

표준물질 MSA가 0.1AU이면 최대 0.5AU의 MSA를 보유한 미지시료에 대해 AutoThreshold 기능을 사용할 수 있습니다.

표준 MSA가 0.5AU이면 최대 1.0AU의 MSA를 보유한 미지 시료에 대해 AutoThreshold 기능을 사용할 수 있습니다.

표준 MSA가 0.5AU이면 최대 1.0AU의 MSA를 보유한 미지 시료에 대해 AutoThreshold 기능을 사용할 수 있습니다.

Purity Angle이 Threshold Angle보다 높을 경우에는 AutoThreshold를 사용하지 않는 것이 좋습니다. 이 경우에는 다음과 같이 하십시오.　

PDA Processing Method에서 Threshold Criteria 매개 변수에 Noise+Solvent 값을 사용합니다.

Solvent Angle을 수동으로 설정합니다.

추가 정보

Auto Threshold 값은 1AU보다 높은 피크에는 사용할 수 없습니다.