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응용 자료 720005094EN에 있는 이동상을 준비하는 방법: 임상 연구를 위해 Mixed-Mode SPE와 친수성 상호작용 크로마토그래피를 사용한 혈장 Catecholamines 및 Metanephrines의 신속 및 동시 분석 - WKB101140

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Article number: 101140To English version

목적 또는 목표

응용 자료 720005094EN에 사용된 이동상 및 샘플 준비 시약을 준비합니다.

환경

  • 혈장 catecholamines
  • 혈장 metanephrines
  • 고체상 추출(SPE)
  • Bridged Ethylene Hybrid (BEH)
  • Amide
  • HILIC (Hydrophilic Interaction Chromatography)
  • Xevo TQ-S
  • 임상 연구

절차

catecholamine/metanephrine 분석을 위한 pH 3.0 이동상의 준비

  1. 장비 및 시약

1.1.            3 포인트 검량이 가능한 pH 측정기

1.2.             pH 1.68, 4.0, 7.0에서의 검량 버퍼

1.3.             Ammonium formate, 99%; Acros 또는 동등 제품.  MW = 63.06

1.4.             Formic acid, 99% LC/MS 등급

1.5.             Ammonium acetate, 99%

1.6.             Acetonitrile, LC/MS 등급

 

  1. 400 mM ammonium formate 원액 준비

2.1.             pH 측정기를 검량합니다.

2.1.1.       pH 1.68, 4.0 및 7.0에서 pH 측정기를 검량합니다. 많은 pH 측정기가 pH 4.0, 7.0 및 10.0에서 검량됩니다. pH 3.0에서 정확한 판독을 위해서는 검량 범위를 확장해야 합니다. pH 1.68 버퍼는 일반적으로 표준 물질로 제공되며 일반적으로 대부분의 상용 pH 측정기의 기본 검량 값 중 하나입니다.

2.2.             12.6g ammonium formate의 무게를 측정합니다.

2.3.             약 300mL MilliQ 물(18.0MΩ)에 용해합니다. 완전히 용해될 때까지 저어줍니다. 10분 이상 초음파 처리하여 완전히 용해되도록 합니다.

2.4.             pH가 3.0에 도달할 때까지 15-25mL 순수 포름산(Optima)을 추가합니다.

참고: pH 측정기가 검량되었는지 확인합니다. pH 3에 도달하면 용액을 10분 동안 혼합합니다. 10분 후 pH 판독값을 다시 확인합니다. 필요에 따라 pH 3.0으로 조정합니다.

2.5.            적당량 MilliQ 물을 500mL가 되게 첨가합니다.

참고: Ammonium formate와 formic acid는 휘발성 용매로 용액에서 증발되기 때문에 해당 용매의 유효 기간은 제한적입니다. 이 중요한 성분의 안정성을 평가해야 합니다.

 

  1. 이동상 B (MPB)의 제조: 85:15 ACN:H2O w/ 30 mM NH4COOH pH 3.0 (Plasma Method)

3.1.             400 mM ammonium formate 원액(pH 3.0) 75mL

3.2.             MilliQ 물 75mL

3.3.             acetonitrile (Optima) 850mL

3.4.             10분 동안 초음파 처리하여 이동상을 완전히 용해시킵니다. (이 염 함량(30mM)은 85% ACN에 용해되는 경계에 있으므로 초음파 처리해야 합니다. 그러나 용액에 유입되면 용액에 남아 있고 추가 조작이 필요하지 않습니다. 참고: 이것은 중요한 성분입니다. 올바르게 제조되지 않을 경우, 특히 catecholamines의 경우 불량한 피크 모양이 나타납니다. 불량한 피크 모양이 관찰되는 경우 주저하지 말고 이 이동상을 다시 작성해야 합니다.

 

  1. 이동상 A (MPA)의 준비: 5:95 ACN:H2O w/ 30 mM NH4COOH pH 3.0

5.1.             400 mM ammonium formate 원액(pH 3.0) 75mL

5.2.             MilliQ 물 875mL

5.3.             ACN (Optima) 50mL

 

  1. 니들 세척액 준비

6.1.             Fixed Loop (FL) 시스템: MPB에 WNW 및 SNW를 배치합니다.

6.2.             FTN (Flow Through Needle) 시스템:

6.2.1.  퍼지 용액: 85:15 ACN:H2O

6.2.2.  세척액: MPB에 넣습니다.

 

샘플 전처리 시약 준비

50mM ammonium acetate: 0.771g qsp 200mL 물(Plasma Method)

1.1.      또는 MilliQ 물에 0.5M 원액 1:10을 희석하여 준비합니다.

참고: 50mM ammonium acetate 버퍼가 조류를 번식시킬 수 있으므로 매일 준비합니다.

  1. 20mM acetate ammonium: 0.308g qsp 200mL 물

2.1.      또는 MilliQ 물에 0.5M 원액 오전 1:25을 희석하여 준비합니다.

참고: 매일 20mM ammonium acetate 버퍼가 조류를 번식시킬 수 있으므로 매일 준비합니다.

  1. 85:15 ACN:H2O: 170mL ACN + 30mL 물
  2. 85:15 ACN:H2O + 2%FA: 50mL of 85:15 ACN:H2O.  1mL formic acid를 추가합니다.

참고: 매일 준비합니다.