각 주입 사이에 역상 컬럼을 재평형화하기 위해 얼마만큼의 빈 컬럼 부피를 사용해야 합니까? - WKB49967

환경

• 역상 컬럼
• 재평형화

답변

5 ~ 10배 컬럼 부피

추가 정보

예: 4.6x150mm 컬럼의 한 컬럼 부피(pi * r² * L)는 2.5mL입니다.

대부분의 역상 컬럼에 대해 5 ~ 10배의 컬럼 부피(12.5 ~ 25mL)로 재평형화하는 것이 좋습니다.

먼저, 10배의 컬럼 부피로 재평형화할 경우 머무름 시간의 재현성을 확인합니다. 재현성이 좋아 보이는 경우, 원한다면 9배의 컬럼 부피(22.5mL)로만 재평형화를 시도할 수 있습니다. 그래도 좋아보인다면 8배의 컬럼 부피로만 재평형화를 시도해 볼 수 있습니다.

새로운 역상 컬럼은 일반적으로 구형의 사용된 컬럼보다 더 많은 재평형화를 필요로 합니다. 구형 컬럼에서 일부 결합 엔드캡 그룹 및/또는 리간드가 손실되었을 수 있기 때문입니다. 따라서 구형 컬럼의 표면에 극성 입자가 더 많을 수 있습니다. 오래된 컬럼 입자 표면은 극성이 더 강하기 때문에 재평형화에 더 적은 컬럼 부피가 사용될 수 있습니다. 이러한 입자 표면은 잔류 유기 용매가 입자 표면에 부착되지 못하게 합니다. 대신 구형 컬럼 표면의 극성 입자가 많을수록 더 높은 수분 함량을 선호하므로 더 적은 컬럼 부피로 재평형화할 수 있습니다.

새로운 컬럼의 표면은 엔드캡 그룹과 리간드로 덮여있습니다. 때문에 입자 표면은 비극성을 가집니다. 입자 표면은 유기물 함량이 높은 이동상을 선호합니다. 재평형화가 시작될 때, 새 컬럼의 입자 표면은 사용한 컬럼에 비해 유기물 함량이 높은 물질을 더 오래 머무르게 합니다. 때문에 새로운 역상 컬럼을 재평형화하는 데 10 컬럼 부피를 사용해야 합니다.

지나치게 작은 컬럼 부피로 역상 컬럼을 재평형화할 때 분석법 검증에 유의해야 합니다. 재평형화 후 재현성이 가장 뛰어난 머무름 시간을 얻으려면 구형(사용된) 역상 컬럼에 필요한 부피를 확인하는 것뿐만 아니라 새 컬럼과 비교하는 것이 좋습니다.