Protein-Pak Hi Res Q 컬럼을 사용하여 빈 캡시드의 AAV 또는 완전한 캡시드의 AAV 응용 자료의 등식 1에서 얻은 반응 인수(RF)는 어떻게 얻은 것입니까? - WKB252955

환경

• 응용 자료
• 아데노 관련 바이러스(AAV)
• 빈 캡시드 대 완전한 캡시드
• 반응 인수(RF)
• Protein-Pak Hi Res Q 
• 이온 교환
• 음이온 교환 크로마토그래피
• 형광 검출기(FLR)
• UV 검출기 (UV)

답변

반응 인수는 전체 캡시드와 빈 캡시드의 피크 면적의 비율로, 전체 캡시드와 빈 캡시드의 동일한 양(농도)을 주입할 때 사용됩니다.

캡시드에 DNA(완전)가 존재할 때와 캡시드가 비어 있을 때 FLR 응답의 실제 FLR 응답은 다릅니다. 빈 캡시드와 같은 농도라도 DNA(완전)가 존재할 경우 FLR 신호가 약간 변경됩니다. 이러한 신호의 차이는 방정식에서 고려되어야 합니다.

RF(공백)가 1.3인 경우[전체가 응답이 높을수록], 신호를 정규화하기 위해 전체의 피크 면적을 1.3으로 나누어야 합니다.

FLR의 경우 RF가 1에 가까워야 합니다.

추가 정보

자세한 내용은 아데노 관련 바이러스의 빈 캡시드의 AAV 또는 완전한 캡시드의 AAV 함량을 결정하기 위한 음이온 교환 크로마토그래피 방정식 1을 참조하십시오.

추가 참조 자료는 형관 및 UV 듀얼 검출기를 이용한 크기 배제 크로마토그래피를 사용하는 Rapid AAV 농도 측정 및 다음 저널 문서: Wang, C. et al. Developing an Anion Exchange Chromatography (AEX) Assay for Determining Empty and Full Capsid Contents in AAV6.2. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2019, 15, 257–263을 참조하십시오.