액체 크로마토그래피(LC) 컬럼의 낮은 분리능의 일반적인 원인은 무엇입니까? - WKB244143

환경

• 컬럼 성능
• 낮은 분리능
• 넓은 피크
• 매트릭스

답변

낮은 분리능의 일반적인 원인은 다음과 같습니다(이에 국한되지 않음).

1. 시스템 분산(대역 확산, 띠 넓어짐)이 너무 높습니다.
   • 주입기와 검출기 사이의 시스템 부피가 너무 크면 피크가 넓어지고 때로는 이로 인해 테일링이 발생할 수 있습니다.
     • 기존 플로우 셀(flow cell)과 비교하여 부피가 더 큰 새 플로우 셀(flow cell)
     • 기존 튜빙에 비해 부피가 더 큰 새 튜빙
2. 주입기와 검출기 사이의 흐름 경로 연결 불량:
   • 페룰(Ferrule) 깊이가 정확하지 않으면 (너무 짧음) 엔드 피팅(Fitting) 내부에 보이드(void)가 발생할 수 있습니다.
     • 새로 연결합니다.
   • 페룰(Ferrule)이 미끄러졌습니다(튜빙이 엔드 피팅(Fitting) 내부로 미끄러져 보이드(void)가 발생할 수 있음)
     • 손가락으로 조이는 PEEK 피팅(Fitting) 사용시 발생 가능합니다.
     • 새 피팅(Fitting)을 설치합니다.
3. 비특이적 바인딩:
   • 단백질 및 산성 분석 물질은 스테인리스 스틸 표면(양이온 인력)과 입자는 물론 소수성 또는 친수성 인력(입자 유형에 따라 다름)을 통해 흡착할 수 있습니다.
     • 회수율 및 분리능을 향상시키기 위해 스테인리스 스틸 및 입자 표면의 "활성 부위"를 포화시키기 위해 고농도의 유기용매로 "컨디셔닝 주입"을 여러 번 수행합니다.
4. 컬럼에 매트릭스 성분 축적:
   • 샘플 매트릭스는 컬럼을 오염시켜 컬럼 주입 간 축적될 수 있습니다.
     • 컬럼 세척 절차를 수행합니다.
5. 미생물 증식/오염:
   • 이는 피크 테일링을 일으킬 수 있지만, 더 자주 볼 수 있는 문제는 분할 피크 또는 낮은 분리능 및 고압 문제입니다
     • 2.5µm 및 2µm 미만 입자 컬럼을 실행할 경우, 고수성 이동상을 가능한 한 24~48시간마다 교체하십시오.
6. 시스템 문제(이에 국한되지 않음):
   • 시스템에서 전달된 잘못된 유속
   • 잘못된 컬럼 온도
   • 잘못된 용매 혼합

추가 정보

이제 Waters는 산성 분석 물질이 컬럼 내부의 스테인리스 스틸 표면에 흡착되는 것을 방지하는 MaxPeak Premier 컬럼을 제공합니다.

참조: MaxPeak Premier 컬럼 웹페이지