올리고뉴클레오티드가 더 이상 용리되지 않음, 20~25회 주입 후 UV 또는 MS에서 검출되지 않음 - WKB243907

증상

• 올리고뉴클레오티드가 더 이상 용리되지 않거나 UV 또는 MS에 의해 검출되지 않습니다
• 3개의 새로운 컬럼이 동일한 시스템에서 동일한 관찰 결과를 제공함: 20~25회 주입 시, 컬럼이 더 이상 올리고뉴클레오티드를 용리하지 않습니다

환경

• ACQUITY UPLC
• OST
• 올리고뉴클레오티드
• 금속 흡수(Metal Absorption)
• 금속 상호 작용
• TEA/HFIP

원인

시스템 구성 요소가 흐름 경로, 주입기 또는 컬럼에 대해 발생한 비특이적 금속 흡수

수정 또는 해결 방법

1. 시스템과 컬럼을 5mM Na2 EDTA를 포함한 80:20의 물/아세토니트릴로 세척합니다.
2. LC 흐름을 waste로 전환합니다(Na2 EDTA가 MS의 시그널을 억제할 수 있음).
3. 라인 A와 B에 세척 용매를 넣고 각 라인을 6분 동안 프라임합니다.
4. 50/50 A/B 세척 용매를 사용하여 0.5mL/분의 유속으로 20분 동안 컬럼을 플러시합니다.
5. 플러시가 끝나면 컬럼을 50/50 Method 버퍼액/ACN에 0.5mL/분의 속도로 10분 동안 노출시켜야 합니다.
6. LC 흐름을 MS에 연결하고 Method 초기 조건에서 컬럼을 평형화합니다.

추가 정보

금속이 있는 경우, 주입기 니들 내부를 세척하기 위해 블랭크 샘플로 5mM Na2 EDTA를 주입해야 합니다. 니들 내부를 컨디셔닝하기 위해 30회 주입해야 합니다.

0.05mM ~ 0.1mM EDTA를 샘플에 추가하여 금속과의 상호 작용을 더욱 줄일 수 있습니다.

올리고뉴클레오티드 크로마토그래피 Method는 각 실행이 끝날 때마다 저 pH 이동상 세척에 포함시켜 주입에서 주입으로의 고정상에서 알칼리 금속 부가물 축적을 줄여야 합니다.

자세한 내용은 올리고뉴클레오티드 LC/MS 분석에서 나트륨 부가물을 줄이기 위한 컬럼 세척 절차는 무엇입니까?를 참조하십시오.