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이동상에 포름산을 사용할 때 역상 컬럼에서 염기성 유기용매의 피크 테일(tail)이 나타나는 이유는 무엇입니까? - WKB236325

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Article number: 236325To English version

환경

  • 액체 크로마토그래피
  • 피크 테일링
  • 트리플루오로아세트산(Trifluoroacetic acid, TFA)
  • 포름산(Formic acid, FA)

답변

염기성 물질 테일링:
테일링은 양전하를 띤 염기가 입자 표면의 음의 표면 실라놀로 이온 교환될 때 발생할 수 있습니다.

0.1% 포름산(FA)을 사용하는 경우:

  • 입자 표면의 표면 실라놀은 0.1% 포름산에서 여전히 약간의 음전하를 띠게 됩니다. pH가 이들 모두를 양성자화 할만큼 충분히 낮지 않기 때문입니다.
  • 염기의 pKa가 5.0보다 큰 경우 염기성 유기용매는 0.1% 포름산에서 양전하를 띠게 됩니다. pKa가 5.0 미만인 경우, 염기성 유기용매의 일부 아민은 여전히 양전하를 띠게 됩니다.
  • 양전하를 띤 염기성 유기용매가 음전하를 띄는 실라놀과 이온 쌍을 이루는 경우 양이온 교환으로 인해 테일링(tailing)이 발생합니다.

0.1% 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid, TFA)를 사용하는 경우:

  • 0.1% TFA는 수용액의 pH를 약 2.0으로 낮춥니다.
    • 이 pH에서 입자 표면의 대부분의 실라놀 그룹은 중화됩니다(하지만 모두는 아님).
  • TFA는 주입된 샘플에 존재하는 양전하를 띤 아민과 이온 쌍을 형성합니다.
    • 이는 사실상 아민의 양전하를 중화시킵니다.
      • 그 결과 소수성 유기용매가 생성됩니다.
  • 표면 실라놀 그룹의 대부분을 중화하고 양전하를 띤 아민에 대한 이온 쌍의 조합은 (포름산만 사용할 때처럼) 양이온 교환 메커니즘이 발생하는 것을 효과적으로 방지합니다.
    • 따라서 TFA는 이동상에서의 테일링을 크게 줄일 수 있습니다.