올리고뉴클레오타이드의 HILIC 분석 및 정제를 위한에 적합한 컬럼은 무엇입니까? - WKB221820

환경

• OBD(Optimum Bed Density)
• 분취용 크로마토그래피
• 실험실 규모의 정제
• Prep 컬럼
• 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)
• Bridged ethylene hybrid(BEH)
• HILIC(Hydrophilic Interaction Chromatography)
• 올리고뉴클레오타이드

답변

ACQUITY BEH Amide(UPLC)

XBridge BEH Amide(HPLC 분석 및 준비)

추가 정보

BEH Amide 컬럼은 7-10kDa 올리고뉴클레오타이드(25-30mer)를 아주 잘 분리할 수 있습니다. (그러나, 아래의 참고 사항을 참조하십시오.)

XBridge BEH Amide OBD Prep 컬럼은 올리고 정제에 사용할 수 있습니다.

예를 들어, XBridge BEH Amide, 130Å, 5µm, 30mm X 100mm(또는 50-150mm 길이)는 과부하 모드에서 수십의 µmoles 주입에 사용될 수 있습니다.

그러나 다음과 같은 문제가 존재합니다.

1. 70% 아세토니트릴(acetonitrile) 용매에 고농도의 올리고뉴클레오타이드를 용해시키는 것은 어렵습니다(올리고의 침전). 올리고는 유기 용매를 좋아하지 않지만 HILIC에는 약 70%의 아세토니트릴이 필요합니다. 그렇지 않으면 피크가 번지거나 샘플이 돌파(breakthrough)됩니다.
2. ACD(At-column dilution)로 이 문제를 해결할 수 있습니다. At-Column Dilution Application Notes(At-Column Dilution 응용 자료)를 참조하여 ACD(At-column dilution)의 작동 방식을 알아보십시오.
3. 올리고의 분리는 최대 20mer까지 가능합니다. 더 긴 올리고는 HILIC에서 해결하기가 더 어렵습니다. Ion-pair reverse-phase(이온쌍 역상)는 사용 가능한 경우 올리고에 대한 더 나은 대안입니다.
4. Method에 이온쌍 시약을 사용해도 괜찮을 경우, 이온쌍 역상(IP-RP) LC가 전반적으로 더 나은 옵션입니다.