LC 컬럼을 실행할 때 피크 분할 문제의 일반적인 원인은 무엇입니까? - wkb194672

환경

• UltraPerformance Liquid Chromatography(UPLC)
• Ultra High Performance Liquid Chromatography(UHPLC)
• 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)
• 피크 분할
• 문제 해결

답변

모든 피크가 분할되는 경우라면 다음과 같은 잠재적 이유가 있습니다.

1. 주입기와 검출기 사이의 흐름 경로 중 어딘가가 부적절하게 연결된 경우; 예를 들면:

• 손가락으로 조이는 PEEK 피팅(Fitting) 사용시 튜브가 미끄러짐
• 스테인레스 피팅(Fitting) 또는 기타 피팅(Fitting)의 페룰(Ferrule) 깊이가 부적절함
• 연결부 내부의 작은 void
• 모든 피크가 영향을 받는 경우, 무용 부피는 종종 컬럼 이후에 발생합니다.

2. 컬럼 Inlet에 박힌 미립자는 다음과 같이 생성될 수 있습니다.

• 샘플의 미립자
• 이동상의 미립자
• 미생물 오염

3. 강한 샘플 용매 효과(때로는 모든 피크에 영향을 미칠 수 있음); 예를 들면:

• 샘플 희석액이 시작 이동상에 비해 비극성 용매(역상)의 비율이 더 높은 경우
• 샘플 희석액이 시작 이동상에 비해 극성 용매(순상; HILIC)의 비율이 더 높은 경우

4. 질량분석기를 실행하는 경우 방출기가 오염되어 피크 모양에 문제가 발생할 수 있습니다.프로브에 무용 부피가 있을 수도 있습니다(Tool-free 버전 아님).

5. HILIC 크로마토그래피로 당을 분석하는 경우, 당은 아노머(개쇄 대 폐쇄)를 형성할 수 있습니다.

6. 컬럼이 오염되었을 수 있습니다(샘플 매트릭스 축적).

 

다른 여러 피크의 혼합물 내에서 일부 피크만 분할됩니다.

1. 강한 샘플 용매 효과(때로는 초기 용리 피크에 영향을 미침); 예를 들면:

• 샘플 희석액이 시작 이동상에 비해 비극성 용매(역상)의 비율이 더 높은 경우
• 샘플 희석액이 시작 이동상에 비해 극성 용매(순상; HILIC)의 비율이 더 높은 경우

2. HILIC 크로마토그래피로 당을 분석하는 경우, 당은 아노머(개쇄 대 폐쇄; 항상 모든 피크에 적용되지 않음)를 형성할 수 있습니다.

3. 주입기와 컬럼 사이의 흐름 경로 중 어딘가가 부적절하게 연결된 경우. 예를 들면:

• 손가락으로 조이는 PEEK 피팅(Fitting) 사용시 튜브가 미끄러짐
• 스테인레스 피팅(Fitting) 또는 기타 피팅(Fitting)의 페룰(Ferrule) 깊이가 부적절함
• 연결부 내부의 작은 void
• 머무름 시간에 따라 피크 모양이 좋아지는 경우, 무용 부피가 컬럼보다 먼저 나타나고 컬럼에 다시 초점을 맞춘 결과 피크 모양이 복원됨

추가 정보