LC 컬럼 막힘, 오염 및 고압 문제의 일반적인 원인은 무엇입니까? - WKB121927

환경

• 컬럼 플러그 꽂기
• 높은 역압(High back pressure)
• 문제 해결

답변

조기 고압 문제를 일으키는 컬럼 막힘의 일반적인 원인은 다음과 같습니다.

1. 미생물 증식/오염(가장 일반적인 경우)

2. 이동상에 생물학적 미립자 유입됨

3. 웨어러블 시스템 부품(예: 펌프 Seal)에서 나오는 비 생물학적 미립자

4. 컬럼에 샘플 및/또는 샘플 매트릭스 축적됨(컬럼 세척 필요)

5. 샘플과 함께 주입되는 미립자

6. 이동상의 용해되지 않는 분석 물질의 침전

7. 높은 유기물에 너무 빨리 노출될 경우 버퍼염의 침전

8. 유속이 너무 빠릅니다(예: 컬럼이 1.0mm I.D.인 경우 유속이 0.6mL/min이면 컬럼이 과압 상태가 됨).

9. 주름지거나 부서진 재사용 가능한 피팅(Fitting) 조각(Peek 페룰(Ferrule) 또는 온피스(on-piece) 손가락으로 조이는 피팅(Fitting) 등)

추가 정보

•  미생물 오염이 문제인 경우:
  • 미생물이 패킹 베드에 묻었기 때문에 컬럼을 제대로 세척할 수 없습니다.
    • 컬럼이 미생물에 의해 오염된 경우에는 백 플러싱으로도 컬럼이 세척되지 않습니다.
      • 이 문제를 해결하려면 용매 용기 필터(sinker)를 폐기하고 (제조업체의 지침에 따라) LC 시스템의 오염을 제거한 다음 새 sinker를 설치하십시오.
        • 미생물 오염의 위험을 낮추기 위해 다음과 같은 적절한 이동상 처리가 필요합니다.
          • 용기에 10% 미만의 유기 물질이 포함된 경우 24 ~ 48시간마다 저염도의 몰 수성(molarity aqueous) 이동상(예: 10mM)을 교체하십시오. 최소 10%의 유기 용매가 포함된 경우 유기 용매가 심하게 증발하지 않는 한 매주 교체할 수 있습니다.
          • Waters BEH SEC 컬럼을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피(SEC Method)에 대해서는 Guide to Size-Exclusion Chromatography (SEC) of mAb Aggregates, Monomers, and Fragments(mAb 응집체, 단량체 및 조각의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 안내서)의 "이동상 처리" 섹션을 참조하십시오.
            • 관련 동영상 보기: Do you have to change aqueous mobile phase every day? | Trust your Science 7 - Highlights how microbial growth can contaminate system in ~2 days and disrupt chromatography.
            • 관련 동영상 보기: Attack of the column killing aqueous mobile phase bacteria! | Trust Your Science 18 - Highlights how a green laser can help you “see” bacterial growth in mobile phase. Also shows impact of microbial contamination on SEC columns.
• 만약 비 생물학적 미립자(이동상, 기기, 샘플 등)에 의해 컬럼이 막혔다면:
  • 컬럼을 0.1mL/분의 속도로 검출기가 아닌 비커로 백 플러싱하여 문제를 해결할 수 있습니다.
    • 비 생물학적 샘플에 의해 컬럼이 막히는 것을 방지하려면 다음과 같이 하십시오.
      • 입자 크기가 3.5µm 이하인 컬럼에 대해 0.2µm의 필터링으로 이동상을 필터링합니다.
      • 입자 크기가 3.5µm 이상의 컬럼에 대해 0.45µm의 필터링으로 이동상을 필터링합니다.
      • 사전 컬럼 인라인(In-line) 필터 또는 가드 카트리지를 사용하면 컬럼이 비 생물학적 미립자로 인해 막히는 것을 방지할 수 있습니다.
      • 지난 12개월 내에 기기 예방 유지 관리(PM)를 수행했는지 확인합니다.
        • 펌프 Seal은 시간이 지남에 따라 마모되고 미세 입자가 이동상과 컬럼의 Inlet 프릿에 유입될 수 있으므로 매년(때로는 더 자주) 교체해야 합니다.
• 만약 샘플 매트릭스가 컬럼에 축적되었다면:
  • 컬럼 관리 및 사용 설명서에 따라 적절한 용매로 컬럼을 세척할 수 있습니다.
• 만약 무언가가 컬럼에 침전된 경우:
  • 긴 시간 동안 완만한 그래디언트를 실행해 침전물을 용해시킬 수 있습니다.