낮은 농도의 항체 전하 변형체를 분석하기 위해 권장되는 Method는 무엇입니까? - WKB106881

환경

• 항체 전하 변형
• Separation Method
• IEX 컬럼
• BioResolve SCX mAb

답변

형광 검출이 있는 BioResolve SCX mAb 컬럼을 사용한 이온 교환은 저농도의 항체 전하 변형체를 분리하며, 형광 검출은 280nm에서의 UV 흡광도보다 약 10배 높은 감도를 제공합니다.

추가 정보

분자량 컷오프(MWCO) 필터(IgG 크기 단백질의 경우 10K)를 이용한 사전 농축은 허용 범위가 더 넓고 단백질 종분화 경향이 덜한 좋은 방법입니다. MWCO 필터 기술을 사용할 경우에도 최적의 주입 부피를 조사하거나 농축된 샘플을 사전 희석하여 pH 및 이온 세기를 낮추어야 합니다.

IEX 컬럼에서는 더 큰 주입 부피를 선택할 수 있지만, 컬럼에 로딩하기 전에 PBS 중의 샘플을 물(또는 낮은 pH에서 10mM MES, 약 5.5-6)에 3배 또는 4배 희석해야 합니다.

이러한 조치는 소량의 전하 변형을 보다 재현성 있게 분석하기 위해 필요합니다(전하된 변형은 10µg/mL에서 시작할 수 있는 단백질 농도보다 5% 낮을 수 있음).